Mahsulotlar

Proteom miqyosidagi fosforillanish hodisalarini tahlil qilish, oqsil fosforillanish tarmoqlarining juda murakkabligi tufayli hali ham asosiy tahliliy muammo bo'lib qolmoqda.Ushbu ishda biz Lys-N, Lys-C va tripsinning bir-birini to'ldirishini ularning fosfoproteomning global tahliliga hissa qo'shish qobiliyatiga qarab baholaymiz.N-terminal atsetillangan, fosforlangan va o'zgartirilmagan peptidlarni samarali ajratish uchun past pH kuchli kation almashinuvining tozalangan versiyasi ishlatilgan.Jami 5036 ortiqcha bo'lmagan fosfopeptidlarni uchta fermentning kombinatsiyasidan foydalangan holda 1 mg proteindan <1% noto'g'ri aniqlash tezligi bilan aniqlash mumkin edi.Bizning ma'lumotlarimiz shuni ko'rsatdiki, turli xil proteazlar bilan yaratilgan fosfopeptid ma'lumotlar to'plamlari o'rtasidagi o'zaro bog'liqlik chegaralangan bo'lsa-da, ikkita o'xshash yaratilgan triptik ma'lumotlar to'plami o'rtasidagi o'xshashlik kamida 4 baravar yuqori ekanligi aniqlandi.Shu tarzda, Lys-N va tripsinning parallel qo'llanilishi aniqlangan fosfopeptidlar sonining faqat tripsin bilan solishtirganda 72% ga ko'payishiga imkon berdi, tripsin replikatsiyasi tajribasi esa atigi 25% ga ko'payishiga olib keldi.Shunday qilib, faqat tripsin va Lys-N ma'lumotlariga e'tibor qaratganimizda, biz 4671 ortiqcha bo'lmagan fosfopeptidlarni aniqladik.Aniqlangan saytlarning keyingi tahlili shuni ko'rsatdiki, Lys-N va tripsin ma'lumotlar to'plamlari sezilarli darajada turli xil fosforlanish motivlari bilan boyitilgan, bu fosfoproteom tahlillarida multiproteaz yondashuvlari juda qimmatli ekanligini yana bir bor tasdiqlaydi.