Atrofimizda ko'plab nomsiz qahramonlar borki, ular oddiy bo'lib ko'rinadi, lekin aslida ular bizga indamay katta hissa qo'shadilar.Proteinaz K molekulyar diagnostika sanoatida "ko'rsatilmagan qahramon" dir, garchi sanoatdagi "katta va kuchli" bilan solishtirganda, proteinaza K juda past kalitli bo'lib, biz uning ahamiyatini uzoq vaqt e'tibordan chetda qoldirganmiz.Yangi toj epidemiyasining boshlanishi bilan proteinaz K ga bo'lgan talab oshdi va uyda va chet elda etkazib berish iste'moldan ancha orqada qoldi va hamma to'satdan K proteinazasi juda muhim ekanligini tushundi.
Proteinaz K dan qanday foydalanish kerak
Proteinaz K - proteolitik ferment faolligi bo'lgan serin proteaza bo'lib, faollikni keng muhitda (pH (4-12,5), yuqori tuzli bufer, 70 ° C yuqori harorat va boshqalar) saqlab turishi mumkin.Bundan tashqari, proteinaz K ning faoliyati SDS, karbamid, EDTA, guanidin gidroxlorid, guanidin izotiyosiyanat va boshqalar tomonidan inhibe qilinmaydi va ma'lum miqdorda detarjen ham proteinaz K. faolligini oshirishi mumkin tibbiy davolashda (virus va mikrobial dezinfeksiya). ), oziq-ovqat (go'shtni yumshatish), teri (sochlarni yumshatish), vinochilik (spirtli ichimliklarni tozalash), aminokislotalarni tayyorlash (buzilgan patlar), nuklein kislotalarni olish, in situ hibridizatsiya va boshqalar, proteinaz K ilovalari mavjud.Eng ko'p ishlatiladigan dastur - nuklein kislota ekstraktsiyasi.
Proteinaz K namunadagi barcha turdagi oqsillarni, shu jumladan nuklein kislotalar bilan chambarchas bog'langan gistonlarni fermentatsiyalashi mumkin, shuning uchun nuklein kislotalar namunadan ajralib chiqishi va ekstraktga chiqishi mumkin, bu ekstraktsiya va tozalashning keyingi bosqichini osonlashtiradi.Virusli nuklein kislotani aniqlashda proteinaza K virus namunasi eritmasining muhim tarkibiy qismlaridan biridir.Proteinaz K virusning qobiq oqsilini yorilishi va faolsizlantirishi mumkin, bu tashish va aniqlash bosqichida xavfsizroqdir;Bundan tashqari, proteinaz K ham RNazni buzishi mumkin, virusli RNK degradatsiyasini oldini oladi va nuklein kislotani aniqlashni osonlashtiradi.
Proteinaz K ning bir kechada mashhurligi
Ilmiy tadqiqot sohasida yoki IVD sohasida bo'ladimi, nuklein kislotani olish eng asosiy tajribadir, shuning uchun proteinaz K har doim juda muhim mavjudlik bo'lib kelgan.Biroq, o'tmishda proteinaz K uning rolidan ko'ra kamroq ma'lum edi.Buning katta qismi, chunki proteinaz K ning talab va taklif munosabatlari juda barqaror edi.Proteinaz K ni etkazib berish muammo bo'ladi deb kam odam o'ylaydi.
Yangi toj epidemiyasining boshlanishi bilan nuklein kislotasini sinovdan o'tkazish talabi oshdi.2020 yil iyun oyining oxiriga kelib, Xitoy 90 millionga yaqin yangi toj sinovlarini yakunladi va bu raqam global miqyosda yanada xavotirli.Nuklein kislota ekstraktsiyasi bo'yicha tajribalarda proteinaz K ning ish konsentratsiyasi taxminan 50-200 mkg / ml ni tashkil qiladi.Odatda, nuklein kislota namunasini olish uchun taxminan 100 mkg proteinaza K kerak bo'ladi.Haqiqiy foydalanishda nuklein kislotasini olish samaradorligini oshirish uchun ko'pincha Proteinaz K ko'proq miqdorda qo'llaniladi.Yangi koronavirusning nuklein kislotasini aniqlash katta miqdordagi proteinaz K talabini keltirib chiqardi.Proteinaz K ning dastlabki talab va taklif muvozanati tezda buzildi va proteinaz K bir kechada muhim epidemiyaning oldini olish materialiga aylandi.
Proteinaz K ishlab chiqarishdagi qiyinchiliklar
Epidemiya rivojlanishi bilan proteinaz K ning muhim qiymati odamlar tomonidan qadrlangan bo'lsa-da, proteinaz K ning haddan tashqari pastligi tufayli bir nechta mahalliy kompaniyalar K proteinazini ishlab chiqarish bilan shug'ullanganligi sharmandali. Proteinaz K ishlab chiqarishni yo'lga qo'ymoqchi. Ishlab chiqarish jarayonida proteinaz K juda maxsus oqsil ekanligi aniqlandi.Proteinaz K ishlab chiqarish quvvatini qisqa vaqt ichida kengaytirish juda qiyin.
Proteinaz K ni keng miqyosda ishlab chiqarish quyidagi qiyinchiliklarga duch keladi
1. Past ifoda
Proteinaz K ko'pchilik oqsillarni o'ziga xos bo'lmagan tarzda parchalashi va ekspression xost hujayrasiga jiddiy toksik ta'sir ko'rsatishi mumkin.Shuning uchun proteinaz K ning ifoda darajasi odatda juda past.Proteinaz K ni yuqori darajada ifodalovchi ekspresyon tizimlari va shtammlarini skrining qilish odatda uzoqroq tsiklni talab qiladi.
2. Pigmentlar va nuklein kislotalarning qoldiqlari
Katta hajmdagi fermentatsiya ko'p miqdorda pigment va nuklein kislota qoldiqlarini kiritadi.Ushbu aralashmalarni oddiy tozalash jarayoni bilan olib tashlash qiyin va murakkab tozalash xarajatlarni oshiradi va tiklanish tezligini pasaytiradi.
3. Beqarorlik
Proteinaz K etarlicha barqaror emas, u o'zini fermentatsiyalashi mumkin va uni himoya qiluvchi vositasiz 37 ° C da uzoq vaqt barqaror saqlash qiyin.
4. Oson cho'ktirish
Proteinaz K ning muzlatilgan quritilgan kukunini tayyorlashda, muzlatilgan quritilgan kukun tarkibidagi proteinaza K ning qattiq miqdori katta bo'lishini ta'minlash uchun yuqori konsentratsiyada muzlatilgan quritilgan himoya vositasini qo'shish kerak, lekin qachon Proteinaz K ning konsentratsiyasi 20mg/ml va undan yuqori darajaga etadi, bu oson yig'ilish cho'kma hosil qiladi, bu esa yuqori qattiq tarkibga ega bo'lgan proteinaz K ni muzlatish bilan quritishda katta qiyinchiliklarga olib keladi.
5. Katta investitsiyalar
Proteinaz K kuchli proteaz faolligiga ega va laboratoriya sharoitida boshqa proteazlarni gidrolizlashi mumkin.Shuning uchun proteinaz K tadqiqot va ishlab chiqish va ishlab chiqarish uchun maxsus ishlab chiqarish maydonlari, uskunalar va xodimlarni talab qiladi.
XD BIOCHEM ning proteinaz K eritmasi
XD BIOCHEM has a mature protein expression and purification platform, and has rich experience in the expression and purification of recombinant proteins and optimization of production processes. Through the rapid formation of a research and development team, the large-scale production process of proteinase K has been overcome. The monthly output of freeze-dried powder is more than 30 KG. The product has stable performance, high enzyme specific activity, and no host cytochrome and nucleic acid residues. Welcome to contact XD BIOCHEM Obtain a trial package (E-mail: sales@xdbiochem.com Tel: +86 513 81163739).
XD BIOCHEM texnik yechimlari o'z ichiga oladi
Ko'p nusxali plazmid integratsiyasidan foydalanib, 8 g / L ifoda darajasiga ega bo'lgan yuqori ekspressiv shtammlar tanlanadi, bu proteinaz K ning past ifoda darajasi muammosini bartaraf etadi;
Ko'p bosqichli tozalash jarayonini o'rnatish orqali proteinaz K ning xost sitoxromi va nuklein kislotasi qoldiqlari standart qiymatdan past darajada muvaffaqiyatli olib tashlandi;
Himoya tampon formulalarini yuqori o'tkazuvchanlik skriningi orqali proteinaz K ni 37 ° C da barqaror saqlashi mumkin bo'lgan bufer tanlangan;
Skrining tamponlari proteinaz K ning yuqori konsentratsiyalarda to'planishi va cho'kishi oson bo'lgan muammoni yengib chiqadi va proteinaz K ning yuqori qattiq tarkibidagi muzlatish bilan quritilishi uchun asos yaratadi.
XD BIOCHEM proteinaz K namunasi
XD BIOCHEM proteinaz K barqarorligi testi: xona haroratida 80 kundan keyin faollikda sezilarli o'zgarishlar bo'lmaydi.
XD BIOCHEM proteinaz K barqarorligi testi: xona haroratida 80 kundan keyin faollikda sezilarli o'zgarishlar bo'lmaydi.
XD BIOCHEM proteinaz K va raqobatdosh mahsulotlarning nuklein kislotasi ekstraktsiya ta'sirini taqqoslash.Nuklein kislotani olish jarayonida mos ravishda XD BIOCHEM va raqobatbardosh proteinaz K ishlatiladi.XD BIOCHEM proteinaz K ning ekstraktsiya samaradorligi yuqoriroq va maqsadli genning Ct qiymati pastroq.
Yuborilgan vaqt: 31-dekabr 2021-yil