Mahsulotlar

Antranilik kislota bilan derivatizatsiya va flüoresansni aniqlashga asoslangan glikoziltransferazlar uchun yangi yuqori samarali suyuqlik xromatografiyasi.

Tahlillar yuqori samarali suyuqlik bilan b1-4 galaktosiltransferaza (GalT-1) va a2-6 sialiltransferaza (ST-6) faolligini o'lchash uchun 2-aminobenzoy kislotasining (2AA; antranilik kislota, AA) noyob etiketlash kimyosidan foydalangan holda ishlab chiqilgan. Floresansiyani aniqlash bilan xromatografiya (HPLC) (Anumula KR. 2006. Glikoproteinli uglevodlarni yuqori samarali suyuq xromatografik tahlil qilish uchun floresan derivatizatsiya usullaridagi yutuqlar. Anal Biochem. 350: 1-23).N-asetilglyukozamin (GlcNAc) va N-asetillaktozamin qabul qiluvchi sifatida, uridin difosfat (UDP)-galaktoza va sitidin monofosfat (CMP)-N-asetilneuramin kislotasi (NANA) mos ravishda GalT-1 va ST-6 donorlari sifatida ishlatilgan.Enzimatik mahsulotlar joyida AA bilan etiketlangan va normal fazali sharoitlardan foydalangan holda TSKgel Amid 80 ustunidagi substratlardan ajratilgan.Ferment birliklari Gal-b1-4GlcNAc va NANA-a2-6 Gal-b1-4GlcNAc bilan bir vaqtda hosil qilingan standartlar bilan taqqoslash yo'li bilan eng yuqori hududlardan aniqlandi.Tahlillar uchun chiziqlilik (vaqt va ferment kontsentratsiyasi), aniqlik (intra- va interassay) va takrorlanuvchanlik o'rnatildi.Tahlillar izolyatsiya va tozalash jarayonida ferment faolligini kuzatishda foydali ekanligi aniqlandi.Tahlillar juda sezgir edi va an'anaviy radioaktiv shakarga asoslangan o'lchovlarga teng yoki undan yaxshiroq bajarildi.Tahlil formati boshqa transferazalarning faolligini o'lchash uchun ham ishlatilishi mumkin, agar uglevod qabul qiluvchilarida etiketkalash uchun qisqartiruvchi uchi mavjud bo'lsa.IgG yordamida glikoprotein qabul qiluvchilar uchun tahlil ishlab chiqilgan.IgG glikanlarini (ikkiantennalik G0, G1, G2, mono- va disialillangan) ajratish uchun qisqa HPLC profillash usuli ishlab chiqildi, bu GalT-1 va ST-6 faolligini tezkor tarzda aniqlashni osonlashtirdi.Bundan tashqari, ushbu profillash usuli klinik sharoitlarda IgG glikanlaridagi o'zgarishlarni kuzatish uchun foydali bo'lishi kerak.