Mahsulotlar

5-ftorurasil (5-FU) va ikkita endogen monofosfat nukleotidning bir nechta metabolitlarini aniq aniqlash uchun biz suyuq xromatografiya-tandem massa spektrometriyasiga (LC-MS/MS) asoslangan original usulni ishlab chiqdik.Ushbu tahlil quyidagilarni aniqlashga imkon berdi: (i) 5-FU yoki 5-ftor-2'-deoksiuridin (5-FdUrd) dan 5-ftor-2'-deoksiuridin-5'-monofosfat (5-FdUMP) ning hujayra ichidagi ishlab chiqarilishi. , (ii) 5-FdUMP kontsentratsiyasining hujayra ichidagi 2'-deoksiuridin-5'-monofosfat (dUMP) / timidin-5'-monofosfat (TMP) nisbatiga ta'siri va (iii) 5-FdUMP ning sekretsiya darajasi va 5-FU ABC tashuvchilar tomonidan inson madaniyati hujayralaridan.Bizning eksperimental sharoitimizda hujayralar 5-FU yoki 5-FUrd bilan inkubatsiya qilindi.Keyin hujayra oqsillari metanol bilan cho'ktirildi.Ushbu protsedura yuqori ekstraktsiyani qayta tiklashni ta'minladi.Bundan tashqari, hujayralardan 5-FU va 5-FdUMP sekretsiyasini o'lchash uchun biz ushbu molekulalarni madaniyat muhitida miqdoriy aniqlashni amalga oshirdik.Media to'g'ridan-to'g'ri AOK qilingan (5-FU) yoki Oasis Wax ekstraksiya kartridji (5-FdUMP) yordamida qattiq fazali ekstraksiya ostida o'tkazildi.Analitlarni ajratish dC18 Atlantis 3,5 mkm, (100 mm × 2,1 mm id) ustunida izokratik rejimda ammoniy formatli tampon/metanol/suv (5/5/90, v/v) yordamida mobil faza sifatida amalga oshirildi.Ishlash vaqti 6,2 daqiqadan oshmadi.Analitlar manfiy ion rejimida elektrosprey interfeysida ionlashtirildi.Biz aralashmalar bo'yicha 2,5-150 ng ml -1 oralig'ida usulni tasdiqladik.Intra- va inter-assay o'zgaruvchanlik etti kun davomida 10% dan past edi.Namunalar kamida ikki hafta davomida -20 °C da saqlanganida va uchta muzlatish-eritish tsiklidan keyin barcha birikmalar hujayralarda yoki madaniy muhitda barqaror edi.Ikkala vositada ham matritsa effekti kuzatilmadi.